13c ureāzes tests: sagatavošana, rezultāti, pozitīvs, negatīvs

Kopš Helicobacter pylori baktērijas atklāšanas, kas saistīta ar hronisku gastrītu un kuņģa un divpadsmitpirkstu zarnas čūlām, ir izstrādātas diagnostikas metodes, tostarp ureāzes tests, kas ļauj noteikt šos mikroorganismus konkrētā pacientā, apstiprinot to iesaistīšanos kuņģa-zarnu trakta slimību attīstībā un nozīmējot efektīvu ārstēšanu.

Ureāzes enzīms kā Helicobacter infekcijas biomarķieris

H. pylori baktērijas pasargā sevi no skābās vides kuņģa lūmenā divos veidos. Pirmkārt, bojājot gļotādu ar savām viciņām, mikroorganismi sasniedz tās zemākos slāņus, tieši līdz epitēlija šūnām, kur pH ir augstāks (t. i., skābums ir zemāks). Otrkārt, baktērijas neitralizē skābi, sintezējot lielu daudzumu katalītiski aktīvā lielmolekulārā metaloenzīma ureāzes jeb urīnvielas amidohidrolāzes.

Ureāzes lietošana Helicobacter diagnostikā ir iespējama ne tikai šī enzīma citoplazmatiskās aktivitātes dēļ, bet arī ārējas mijiedarbības ar saimniekšūnām dēļ.

Ureāzes iedarbībā notiek kuņģa urīnvielas sadalīšanās ūdeņraža nitrīdā (amonjakā) un oglekļa dioksīdā (ogļskābā gāze). Tie reaģē ar kuņģa sulā esošo sālsskābi un nodrošina neitrālas skābuma zonu ap H. pylori, kā arī atbalsta baktēriju šūnu metabolismu.

Tāpēc ureāze ir vissvarīgākais faktors H. pylori kolonizācijā cilvēka kuņģa gļotādā, un ureolītiskās aktivitātes noteikšana tiek uzskatīta par šīs baktērijas virulences biomarķieri, ko gastroenterologi – veicot ureāzes testu – izmanto Helicobacter infekcijas diagnosticēšanai, kā arī zāļu izraisītas baktēriju iznīcināšanas (izskaušanas) rezultātu uzraudzībai.

H. pylori diagnostika ietver invazīvus un neinvazīvus testus – atkarībā no tā, vai ir nepieciešama kuņģa endoskopiska izmeklēšana (fibrogastroduodenoskopija) vai nē. Invazīvais tests ir ureāzes eksprestests jeb eksprestests (RUT-tests), kam nepieciešama audu paraugu iegūšana (biopsija). Visizplatītākais neinvazīvais tests ir 13C urīnvielas elptests (13C-UBT).

Jāatzīmē, ka neinvazīva H.pylori diagnostika var tikt veikta, izmantojot asins analīzi antivielu noteikšanai (specifiskums 75% līmenī, jutība - 84%), urīna ELISA (ar jutību 96% un specifiskumu 79%) un koprogrammu baktēriju antigēnu noteikšanai. Plašāka informācija - Helicobacter pylori infekcija: antivielas pret Helicobacter pylori asinīs

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Norādes uz procedūru ureāzes tests

H. pylori kolonizācija kuņģa gļotādā pati par sevi nav slimība; tas ir faktors, kas palielina baktēriju slodzi uz organismu, kas noteiktos apstākļos var izraisīt vairāku kuņģa un augšējā kuņģa-zarnu trakta patoloģiju attīstību.

Helicobacter infekcijas diagnostikas indikācijas, jo īpaši ureāzes tests, ir saistītas ar gastrītu ar paaugstinātu skābumu, antrālo un atrofisko gastrītu, duodenītu, kuņģa čūlu un divpadsmitpirkstu zarnas čūlu, kuņģa MALT limfomu. Pēc agrīnas stadijas kuņģa vēža endoskopiskas rezekcijas var veikt histoloģisku izmeklēšanu kombinācijā ar ureāzes eksprestestu - FGDS ar ureāzes testu.

Gastroenterologi var izrakstīt ureāzes testu, ja pacienti sūdzas par smaguma sajūtu un diskomfortu epigastrālajā reģionā, biežu grēmas pēc ēšanas, skābu vai puvušu atraugas, rūgtumu mutē, sliktu dūšu, zarnu darbības traucējumiem, sāpēm vai krampjiem kuņģī.

[ 8 ], [ 9 ]

Sagatavošana

Gatavošanās 13C urīnvielas elptestam sastāv no pacienta pārtraukšanas: 4 nedēļas pirms testa lietot antibiotikas, bet vismaz divas nedēļas iepriekš – NPL, protonu sūkņa inhibitorus (kuņģa skābuma samazināšanai) un antacīdus vai adsorbentus, ko lieto grēmas gadījumā. Jebkuru medikamentu lietošana jāpārtrauc piecas līdz sešas dienas, bet alkohola lietošana un smēķēšana – trīs dienas pirms testa.

Tāpat ieteicams apmēram nedēļu pirms testēšanas neēst pākšaugus, jo pupiņas, zirņi, lēcas, sojas pupiņas un pupiņas satur ureāzi (kas aizsargā augus no slimībām un kukaiņu kaitēkļiem).

Vakarā pirms testa vēlu, smagas vakariņas ir kontrindicētas; testa dienā jāveic normāla mutes dobuma higiēna, un pusotru stundu pirms testa nedrīkst neko dzert vai lietot košļājamo gumiju.

[ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tehnika ureāzes tests

Īstenošanas tehnika:

• Vispirms tiek ņemts pamata elpošanas paraugs — izelpa tiek veikta mīkstā plastmasas traukā (un hermētiski noslēgta);
• šķidrums ar pievienotu 13C-urīnvielu tiek lietots iekšķīgi;
• Pēc 25–30 minūtēm otru izelpotā gaisa paraugu ņem citā traukā.

Šādā veidā iegūtie paraugi tiek analizēti ar masas spektrometru, atdalot izotopus otrajā paraugā un nosakot to koncentrāciju. Starpība starp vērtībām otrajā un pirmajā paraugā tiek izteikta kā delta (δ), salīdzinot ar sākotnējo līmeni. Normālās vērtības, t.i., iezīmētā atoma 13C negatīvās vērtības neinficētiem pacientiem svārstās no 0,15 līdz 0,46%, un pozitīvās vērtības infekcijas klātbūtnē ir 1,2–9,5% ar urīnvielas hidrolīzes ātrumu vairāk nekā 12–14 μg/min.

Vienkārši sakot: ar 13C iezīmēta oglekļa dioksīda noteikšana izelpotajā gaisā norāda, ka urīnvielu ir hidrolizējis ureāzes enzīms H. pylori, kas faktiski apstiprina tās klātbūtni kuņģī.

H. pylori elptests

13C-UBT tests jeb 13C urīnvielas elptests Helicobacter pylori noteikšanai ir viena no svarīgākajām neinvazīvajām metodēm šīs infekcijas noteikšanai: ar 100% jutību un 98% specifiskumu viltus pozitīvu un viltus negatīvu rezultātu risks salīdzinājumā ar histoloģiju un asins antivielu testēšanu ir par 2,3% mazāks.

Analīzes pamatā ir perorāli ievadītas šķidras urīnvielas, kas iezīmēta ar oglekļa atomu (stabils neradioaktīvs izotops) 13C (50–75 mg 13C-urīnvielas, atšķaidītas 100 ml šķidruma), hidrolīze ar H. pylori ureāzi.

Ar izotopu indikatoru iezīmēta urīnviela kuņģī hidrolizējas, atbrīvojot amonjaku un oglekļa dioksīdu, kas satur iezīmētus atomus, kas difundējas asinīs un elpošanas laikā tiek izvadīti no plaušām. Iezīmēto oglekļa dioksīdu reģistrē analītiska ierīce - masas spektrometrs, kura darbība balstās uz nedispersīvu izotopu selektīvo spektroskopiju, vai infrasarkanais spektroskopiskais analizators.

Ātrais ureāzes tests

Ātro ureāzes testu (RUT) veic kuņģa un divpadsmitpirkstu zarnas endoskopiskās izmeklēšanas laikā, izmantojot mūsdienīgus endofibroskopus, un vienlaikus savācot biopsijas paraugus. Biomateriāls ir jāņem no kuņģa antrālās daļas. Tāpēc fibrogastroduodenoskopija jeb FGDS ar ureāzes testu ir invazīva diagnostikas metode.

Iegūto biopsiju pilnībā iegremdē sagatavotā standartizētā vidē, kas satur agara želeju, urīnvielu, skābju-bāzes indikatoru fenolsulfoftaleīnu un bakteriostatisku līdzekli (pievienots, lai novērstu piesārņojošu mikroorganismu augšanu un viltus pozitīvus rezultātus).

Ja kuņģa audu paraugā ir H. pylori baktērijas, to saražotā ureāze hidrolizēs urīnvielu un paaugstinās pH līmeni, kas ir skaidri redzams, indikatoram mainoties no dzeltenas uz oranžu (pie pH 6,8) un violetu (pie pH > 8). 75% pozitīvo testu maina krāsu 120–180 minūšu laikā, un jo ātrāk maina indikatora krāsu, jo lielāks baktēriju skaits. Taču testi, kas šķiet negatīvi, tiek glabāti 24 stundas.

Pozitīvs ātrais ureāzes tests, ko tas nozīmē? Pozitīvs RUT tests – indikators kļūst sarkans – nozīmē, ka agara vidē ievietotajā biopsijas paraugā ir vismaz 105 H. pylori baktērijas, lai gan to koncentrācija parasti ir augstāka.

Dažādu testa modifikāciju jutība svārstās 90–98% robežās, bet specifiskums – 97–99%.

Kā norāda gastroenterologi, ja pacienta secinājums liecina par strauji pozitīvu ureāzes testu (trīs krusti), tas nozīmē: pH > 8, un indikators mainīja krāsu mazāk nekā 60 minūtēs no biopsijas iegremdēšanas brīža, kas norāda uz lielu H.pylori skaitu un augstu ureāzes ekspresijas līmeni. Aptuveno baktēriju skaitu var saskaitīt biopsijas histoloģiskās izmeklēšanas laikā mikroskopā, un, ja vizualizētajā zonā tas pārsniedz 40-50, infekcijas līmenis tiek uzskatīts par augstu.

13C urīnvielas elptests reti sniedz viltus pozitīvus rezultātus, un pacientiem ar aizdomām par kuņģa vai divpadsmitpirkstu zarnas čūlu viens pozitīvs tests tiek uzskatīts par diagnozes apstiprināšanu, savukārt negatīvs rezultāts jāapstiprina ar EGD kopā ar urīnvielas testu.