A hepatīta vīruss

Vīrushepatīts A ir cilvēku infekcijas slimība, kam raksturīgi galvenokārt aknu bojājumi un kas klīniski izpaužas kā intoksikācija un dzelte. A hepatīta vīrusu 1973. gadā atklāja S. Feinstons (u.c.), izmantojot imūnās elektronmikroskopijas metodi un inficējot pērtiķus - šimpanzes un murkšķus. Imūnās elektronmikroskopijas metodes būtība ir tāda, ka pacienta ar A hepatītu fekāliju filtrātam pievieno specifiskas antivielas (atveseļošanās serumu), un nogulsnes pakļauj elektronmikroskopijai. Vīrusu mijiedarbības dēļ ar specifiskām antivielām tie piedzīvo specifisku agregāciju. Šajā gadījumā tos ir vieglāk atklāt, un agregācija antivielu ietekmē apstiprina patogēna specifiskumu. S. Feinstona atklājums tika apstiprināts eksperimentos ar brīvprātīgajiem.

A hepatīta vīruss ir sfērisks, viriona diametrs ir 27 nm. Genomu attēlo vienpavediena pozitīva RNS ar MD 2,6 mm. Nav superkapsīda. Simetrijas tips ir kubisks - ikosaedrs. Kapsīdam ir 32 kapsomēri, to veido četri polipeptīdi (VP1-VP4). Pēc savām īpašībām A hepatīta vīruss pieder pie Heparnovirus ģints, Picornaviridae dzimtas. Antigēnu ziņā A hepatīta vīruss (HAV - A hepatīta vīruss) ir homogēns. HAV labi vairojas šimpanžu, paviānu, hamadryas paviānu un marmozetu organismā. Ilgu laiku vīrusu nevarēja kultivēt. Tikai 20. gadsimta 80. gados bija iespējams iegūt šūnu kultūras, kurās vairojas HAV. Sākotnēji šiem mērķiem tika izmantotas rēzus makaka embrija nieru nepārtrauktas šūnu līnijas (kultūra FRhK-4), bet tagad tiek izmantota zaļo pērtiķu nieru šūnu nepārtraukta šūnu līnija (kultūra 4647).

Saskaņā ar PVO ekspertu ieteikumiem ir pieņemta šāda A hepatīta vīrusa marķieru nomenklatūra: A hepatīta vīruss - HAV antivielas pret A hepatīta vīrusu: anti-HAV IgM un anti-HAV IgG.

HAV ir maza daļiņa ar diametru 27–30 nm, tai ir ikosaedriska simetrija un homogenitāte. Ar imūnās agregācijas metodi iegūtā elektronogramma atklāj elektronblīvas daļiņas ar virspusēji simetriski izvietotiem kapsomēriem. Ar negatīvu kontrastu preparātos atklājas gan pilnas, gan tukšas daļiņas. HAV nukleokapsīdam, atšķirībā no gripas vīrusa, nav virsmas izvirzījumu un membrānas. Svarīgi ir arī tas, ka HAV virionam nav sirdsveida struktūras.

Pamatojoties uz tā fizikāli ķīmiskajām īpašībām, A hepatīta vīruss tiek klasificēts kā pikornavīrusu dzimtas, enterovīrusu ģints ar sērijas numuru 72. Tomēr šī taksonomija izrādījās pārāk neparasta, un PVO uzskatīja par iespējamu saglabāt terminoloģiju "A hepatīta vīruss".

Tāpat kā visi Picornaviridae dzimtas vīrusi, arī A hepatīta vīruss satur ribonukleīnskābi. Dažas laboratorijas ir pierādījušas A hepatīta vīrusa genoma klonēšanas iespēju, kas paver iespēju iegūt vakcīnas.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

A hepatīta vīrusa rezistence

Vīruss ir relatīvi izturīgs pret augstām temperatūrām, skābēm, tauku šķīdinātājiem (bez lipīdiem), dezinfekcijas līdzekļiem un labi panes zemu temperatūru. Tas viss veicina tā ilgstošu saglabāšanos ārējā vidē. Istabas temperatūrā tas izdzīvo vairākas nedēļas, 60 °C temperatūrā tas daļēji zaudē savu infekciozitāti pēc 4–12 stundām un pilnībā – pēc dažām minūtēm 85 °C temperatūrā. Tas ir ļoti izturīgs pret hloru, kā rezultātā tas spēj iekļūt krāna ūdenī caur ūdens attīrīšanas iekārtu barjerām.

Apkopojot visus datus, mēs varam raksturot A hepatīta vīrusu šādi:

• dabiskais saimnieks ir cilvēks;
• eksperimentālie dzīvnieki - murkšķi, šimpanzes;
• infekcijas avots ir fekālijas;
• slimība ir epidēmiska un endēmiska;
• pārnešanas ceļš: feko-orāls;
• inkubācijas periods - 14-40 dienas;
• pāreja uz hronisku hepatītu - nav novērota.

HAV imunoloģiskās īpašības ir šādas:

• Prototipiskie celmi — Ms-1, CR-326, GВG. Visi ir imunoloģiski līdzīgi vai identiski;
• Antivielas - IgM un IgG - tiek ražotas, reaģējot uz vīrusa strukturālo olbaltumvielu ieviešanu, un tās ir aizsargājošas;
• I. Cilvēka seruma gamma globulīna aizsargājošā iedarbība — novērš vai vājina slimību, ja to ievada pirms inficēšanās vai inkubācijas periodā.

NAU fizikāli ķīmiskās īpašības ir šādas:

• Morfoloģija: bezčaumalas sfēriska daļiņa ar kubisku simetriju, kapsīds sastāv no 32 kapsomēriem;
• Diametrs - 27-30 nm;
• Blīvums CsCl (g/cm3) - 1,38–1,46 (atvērtas daļiņas), 1,33–1,34 (nobriedis virions), 1,29–1,31 (nenobrieduši virioni, tukšas daļiņas);
• Sedimentācijas koeficients - 156-160 nobriedušu virionu;
• Nukleīnskābe ir vienpavediena, lineāra RNS;
• Relatīvā molekulmasa - 2,25 106-2,8 106KD;
• Nukleotīdu skaits ir 6500–8100.

HAV stabilitāte fizikālu un ķīmisku ietekmju ietekmē ir šāda:

• Hloroforms, ēteris — stabils;
• Hlors, 0,5–1,5 mg/l, 5 °C, 15 min — daļēja inaktivācija;
• Hloramīns, 1 g/l, 20 °C, 15 min — pilnīga inaktivācija;
• Formalīns, 1:4000, 35–37 °C, 72 h — pilnīga inaktivācija, 1:350, 20 °C, 60 min — daļēja inaktivācija.

Temperatūra:

• 20–70 °C — stabils;
• 56 °C, 30 min — stabils;
• 60 °C, 12 h — daļēja inaktivācija;
• 85 °C, 1 minūte — pilnīga inaktivācija;
• Autoklāvēšana, 120 °C. 20 min — pilnīga inaktivācija;
• Sausā karstumā, 180 °C, 1 stunda — pilnīga inaktivācija;
• NLO, 1,1 W, 1 minūte — pilnīga inaktivācija.

Iesniegtie dati liecina, ka pēc fizikāli ķīmiskajām īpašībām A hepatīta vīruss ir vistuvākais enterovīrusiem. Tāpat kā citi enterovīrusi, HAV ir izturīgs pret daudziem dezinfekcijas šķīdumiem un tiek pilnībā inaktivēts dažu minūšu laikā 85 °C temperatūrā un autoklāvā.

Ir pierādīts, ka A hepatīta vīruss var vairoties cilvēka un pērtiķu šūnu kultūru primārajās un nepārtrauktajās monoslāņa līnijās. Īpaši aktīva A hepatīta vīrusa vairošanās in vitro kultūrās tiek novērota, ja kā izejvielu izmanto slimu pērtiķu aknu ekstraktus. Tomēr jāatzīmē, ka visos eksperimentos par A hepatīta vīrusa vairošanos in vitro kultūrās uzmanība tiek pievērsta ilgajam inkubācijas periodam primāro pasāžu laikā (līdz 4–10 nedēļām), pēc tam vīrusa ģenētiskā materiāla uzkrāšanās palielinās, bet absolūtās vērtības joprojām ir ļoti nenozīmīgas, kas daudziem pētniekiem dod pamatu runāt par nepilnīgu A hepatīta vīrusa replikāciju audu kultūrās.

Apkopojot literatūras datus par A hepatīta vīrusa vairošanos ārpus audu kultūrās, var teikt, ka HAV ilgstošas izdzīvošanas fakts in vitro ir neapšaubāms. Optimāli apstākļi stabilam augstam vīrusa replikācijas līmenim vēl nav pilnībā identificēti, un tas kavē tā bioloģisko īpašību izpēti, reaģentu avota iegūšanu diagnostikas ražošanai un vakcīnu izstrādei.

Vienlaikus literatūrā var atrast optimistiskākus spriedumus par šo problēmu. Visu ar A hepatīta vīrusa kultivēšanu saistīto jautājumu risinājums ir tuvākās nākotnes jautājums. Pētot optimālos apstākļus HAV reprodukcijai rēzus makaka embrionālo nieru šūnu kultūrā, tika identificētas divas fāzes: infekciozā vīrusa ražošanas fāze (līdz 6-8 dienām 5. pasāžas līmenī) un vīrusa antigēna intensīvas uzkrāšanās fāze. Tika arī pierādīts, ka visnozīmīgākā vīrusa antigēna uzkrāšanās notiek tā sauktās veltņu kultivēšanas apstākļos (rotējošās kolbas). Šī metode paver plašas iespējas iegūt kultūras antigēnu lielos daudzumos, un līdz ar to parādīsies izejmateriāls diagnostikas sistēmu sagatavošanai un vakcīnu ražošanai.

A hepatīta epidemioloģija

A hepatīta vīruss cilvēkiem ir ļoti patogēns. Saskaņā ar PVO (1987) datiem, slimības izraisīšanai pietiek ar inficēšanos tikai ar vienu virionu. Tomēr praktiskā infekciozā deva, iespējams, ir daudz lielāka. Vienīgais infekcijas avots ir inficēta persona. Vīruss lielos daudzumos izdalās ar izkārnījumiem 12–14 dienas pirms dzeltes sākuma un 3 nedēļu laikā no dzeltes perioda. Nav konstatētas būtiskas atšķirības patogēna izdalīšanā pacientiem ar A hepatīta ikteriskām, anikteriskām un asimptomātiskām formām. Infekcijas ceļš ir fekāli-orāls, galvenokārt ar ūdeni, kā arī mājsaimniecības un pārtikas ceļā. Infekcijas ceļš ir fekāli-orāls, galvenokārt ar ūdeni, kā arī mājsaimniecības un pārtikas ceļā. Galvenais (primārais) vīrusa pārnešanas ceļš ir ar ūdeni. Iespējama arī inficēšanās ar gaisa pilieniņām. Iedzīvotāju uzņēmība ir universāla. Galvenokārt tiek skarti bērni līdz 14 gadu vecumam. Slimībai ir izteikta rudens-ziemas sezonalitāte.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ]

A hepatīta simptomi

Inkubācijas periods svārstās no 15 līdz 50 dienām atkarībā no vīrusa infekciozās devas, bet vidēji tas ir 28–30 dienas. Nonākot organismā, A hepatīta vīruss vairojas reģionālajos limfmezglos, iekļūst asinīs un pēc tam aknu šūnās un izraisa akūtu difūzu hepatītu, ko pavada hepatocītu un aknu retikuloendoteliālo elementu bojājumi un to detoksikācijas un barjeras funkciju samazināšanās. Hepatocītu bojājumi rodas nevis vīrusa tiešas iedarbības dēļ, bet gan imunopatoloģisku mehānismu rezultātā. Tipiskākā A hepatīta aina ir akūta ikteriska cikliska forma: inkubācijas periods, prodromāls (preikterisks), ikterisks periods un atveseļošanās. Tomēr infekcijas perēkļos tiek atklāts liels skaits pacientu ar anikteriskām un asimptomātiskām infekcijas formām, kuru skaits ievērojami dominē pār ikteriskām ("aisberga fenomens").

Pēcinficēšanās imunitāte ir spēcīga un ilgstoša, ko izraisa vīrusu neitralizējošas antivielas un imūnās atmiņas šūnas.

A hepatīta mikrobioloģiskā diagnostika

A hepatīta diagnostika (izņemot dzīvnieku - šimpanžu, murkšķu, paviānu - inficēšanos, kuras mums nav) balstās uz dažādām imunoloģiskām metodēm: RSC, imunofluorescences metodi, imūnās adhēzijas hemaglutināciju (vīrusu antigēna + antivielas komplekss komplementa klātbūtnē adsorbējas uz eritrocītiem un izraisa to salipšanu). Tomēr šo metožu izmantošanas iespējas ir ierobežotas specifisku vīrusu antigēnu trūkuma dēļ, un imunofluorescences reakcijai nepieciešama aknu biopsija, kas nav vēlama. Imūnās elektronmikroskopijas metode ir uzticama un specifiska, taču tā ir ļoti darbietilpīga. Tāpēc līdz šim vienīgā pieņemamā imunoloģiskā reakcija ir cietās fāzes imūnsorbcijas analīzes metode IFM vai RIM veidā, īpaši M klases imūnglobulīnu "uztveršanas" modifikācijā. Mūsu valstī šim nolūkam ir piedāvāta testa sistēma - "DIAGN-A-HEP". Šīs testa sistēmas darbības princips ir šāds. Vispirms uz polistirola iedobumu sieniņām adsorbē antivielas pret M klases imūnglobulīniem (antiimmunoglobulīni M), pēc tam pievieno testējamo pacienta serumu. Ja tas satur IgM antivielas, tās saistīsies ar M klases antivielām, pēc tam pievieno specifisku vīrusu antigēnu (A hepatīta vīrusu), ko iegūst, audzējot šūnu kultūrā. Sistēmu mazgā, un tai pievieno ar mārrutku peroksidāzi iezīmētas pretvīrusu antivielas. Ja mijiedarbojas visi četri sistēmas komponenti, veidojas četrslāņu "sviestmaize":

• antiimūnglobulīni M,
• imūnglobulīni M (pret A hepatīta vīrusu - pētāmā pacienta serumā),
• vīrusa antigēns,
• Ar enzīmiem iezīmētas pretvīrusu antivielas.

Lai noteiktu šo kompleksu, iedobēm pievieno fermenta substrātu. Fermenta ietekmē tas tiek iznīcināts un veidojas krāsains produkts. Krāsas intensitāti var kvantitatīvi izmērīt, izmantojot spektrofotometru vai fotokolorimetru.

IgM "uztveršanas" metodes priekšrocība ir tā, ka šīs imūnglobulīnu klases antivielas parādās primārās imūnās atbildes laikā un norāda uz aktīvo infekcijas stadiju, tās izzūd pēc slimības pārciesšanas. Pretvīrusu antivielas, kas pieder pie IgG klases, turpretī saglabājas ilgu laiku pēc slimības pārciesšanas, nodrošinot iegūto imunitāti. A hepatīta vīrusa noteikšanai ir piedāvāta DNS zondes metode: kā zonde tiek izmantota komplementārā vRNS DNS.

A hepatīta ārstēšana

Tā kā vīrusu hepatīta gadījumā interferona ražošana ir traucēta, A hepatīta ārstēšana balstās uz interferona un tā endogēnās sintēzes induktora amiksīna lietošanu.

Specifiska A hepatīta profilakse

Iepriekš plaši izmantotā A hepatīta seroprofilakse ar gamma globulīnu sevi neattaisnoja, tāpēc galvenais uzsvars tika likts uz vakcinācijas profilakses veikšanu, tiek veikta vakcinācija pret A hepatītu. Šim nolūkam tiek izstrādātas un jau tiek izmantotas dažāda veida vakcīnas. Krievijā efektīva vakcīna pret A hepatītu tika iegūta 1995. gadā, un tagad tā tiek veiksmīgi lietota.