Visi iLive saturs ir medicīniski pārskatīts vai pārbaudīts, lai nodrošinātu pēc iespējas lielāku faktisko precizitāti.
Mums ir stingras iegādes vadlīnijas un tikai saikne ar cienījamiem mediju portāliem, akadēmiskām pētniecības iestādēm un, ja vien iespējams, medicīniski salīdzinošiem pārskatiem. Ņemiet vērā, ka iekavās ([1], [2] uc) esošie numuri ir klikšķi uz šīm studijām.
Ja uzskatāt, ka kāds no mūsu saturiem ir neprecīzs, novecojis vai citādi apšaubāms, lūdzu, atlasiet to un nospiediet Ctrl + Enter.
PCR kā ģenētisko slimību diagnostikas metode
Raksta medicīnas eksperts
Pēdējā pārskatīšana: 04.07.2025
PCR ir jauns molekulārās ģenētikas sasniegums, ko izmanto DNS amplifikācijai un kas ļauj ātri in vitro pavairot noteiktu DNS reģionu (t. i., jebkuru interesējošu gēnu) vairāk nekā 200 000 reižu. Lai veiktu reakciju, pietiek ar DNS materiālu no vienas šūnas; ar PCR amplificētās DNS daudzums ir tik liels, ka šo DNS var vienkārši iekrāsot (pēc elektroforēzes nav nepieciešams izmantot radioaktīvās zondes). Priekšnoteikums PCR veikšanai ir zināšanas par amplificētā DNS reģiona nukleotīdu secību, lai pareizi izvēlētos mākslīgi sintezētus praimerus.
Pašlaik PCR ir vienas mēģenes process, kas sastāv no atkārtotiem noteiktas DNS molekulas secības amplifikācijas (reproducēšanas, kopēšanas) cikliem, lai iegūtu pietiekami lielu kopiju skaitu, ko var identificēt ar elektroforēzi. Viena no reakcijas galvenajām sastāvdaļām ir "primeri" - sintētiski oligonukleotīdi, kas sastāv no 20-30 bāzēm, kas ir komplementāri atkvēlināšanas (piestiprināšanas) "vietām" (zonām) uz identificētās matricas DNS zonas.
PCR notiek automātiski programmējamā termostatā - termociklerā (pastiprinātājā). Trīspakāpju cikls, kura rezultātā tiek iegūtas precīzas identificētās matricas DNS sadaļas kopijas, tiek atkārtots 30-50 reizes saskaņā ar norādīto termociklera programmu. Pirmajā ciklā oligoprimeri hibridizējas ar sākotnējo matricas DNS un pēc tam (nākamajos ciklos) ar jaunsintezētām DNS molekulām, tām uzkrājoties reakcijas maisījumā. Pēdējā gadījumā DNS sintēze beidzas nevis temperatūras izmaiņu rezultātā, bet gan sasniedzot amplificētās sadaļas DNS polimerāzes robežu, kas nosaka jaunsintezētās DNS sadaļas lielumu ar viena nukleotīda precizitāti.
Kā iegūto DNS molekulu noteikšanas metode tiek izmantota elektroforēze, ar kuras palīdzību amplificētais materiāls tiek atdalīts pēc amplikonu (amplifikācijas produktu) lieluma.
PCR var izmantot, lai tieši pārbaudītu aizdomīgo mutāciju vai polimorfo vietu atrašanās vietas, kā arī lai pētītu jebkuru citu specifisku DNS pazīmju klātbūtni.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]