Visi iLive saturs ir medicīniski pārskatīts vai pārbaudīts, lai nodrošinātu pēc iespējas lielāku faktisko precizitāti.
Mums ir stingras iegādes vadlīnijas un tikai saikne ar cienījamiem mediju portāliem, akadēmiskām pētniecības iestādēm un, ja vien iespējams, medicīniski salīdzinošiem pārskatiem. Ņemiet vērā, ka iekavās ([1], [2] uc) esošie numuri ir klikšķi uz šīm studijām.
Ja uzskatāt, ka kāds no mūsu saturiem ir neprecīzs, novecojis vai citādi apšaubāms, lūdzu, atlasiet to un nospiediet Ctrl + Enter.
Restrikcijas fragmentu garuma polimorfisma analīze
Raksta medicīnas eksperts
Pēdējā pārskatīšana: 05.07.2025
Plaši izplatītā dažādu restrikcijas endonukleāžu izmantošana hromosomu DNS analīzē ir atklājusi cilvēka genoma milzīgo mainīgumu. Pat nelielas izmaiņas strukturālo gēnu kodējošajos un regulējošajos reģionos var izraisīt noteikta proteīna sintēzes pārtraukšanu vai tā funkcijas zudumu cilvēka organismā, kas parasti ietekmē pacienta fenotipu. Tomēr aptuveni 90% cilvēka genoma sastāv no nekodējošām sekvencēm, kas ir mainīgākas un satur daudzas tā sauktās neitrālās mutācijas jeb polimorfismus, un tām nav fenotipiskas izpausmes. Šādi polimorfie reģioni (lokusi) tiek izmantoti iedzimtu slimību diagnostikā kā ģenētiskie marķieri. Polimorfie lokusi atrodas visās hromosomās un ir saistīti ar noteiktu gēna reģionu. Nosakot polimorfā lokusa lokalizāciju, ir iespējams noteikt, kurš gēns ir saistīts ar mutāciju, kas izraisīja slimību pacientam.
Lai izolētu polimorfās DNS reģionus, tiek izmantoti baktēriju enzīmi - restriktāzes, kuru produkts ir restrikcijas vietas. Spontānas mutācijas, kas rodas polimorfās vietās, padara tās rezistentas vai, gluži pretēji, jutīgas pret specifiskas restriktāzes darbību.
Mutāciju mainīgumu restrikcijas vietās var noteikt, mainot DNS restrikcijas fragmentu garumu, atdalot tos ar elektroforēzes palīdzību un pēc tam hibridizējot ar specifiskām DNS zondēm. Ja polimorfā vietā nav restrikcijas, elektroforogrammās tiks atklāts viens liels fragments, bet tā klātbūtnē - mazāks fragments. Restrikcijas vietas klātbūtne vai neesamība identiskos homologu hromosomu lokusos ļauj diezgan droši marķēt mutanta un normāla gēna fragmentus un izsekot tā pārnešanu uz pēcnācējiem. Tādējādi, pētot pacientu DNS abās hromosomās, kurām restrikcijas vieta atrodas polimorfā reģionā, elektroforogrammā tiks atklāti īsi DNS fragmenti. Pacientiem, kuriem ir homozigota mutācija, kas maina polimorfo restrikcijas vietu, tiks atklāti garāki fragmenti, bet heterozigotiem pacientiem - īsi un gari fragmenti.
[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]