A vitamīns asinīs

A vitamīna (retinola) koncentrācijas references vērtības (norma) asins serumā: bērniem vecumā no 1 līdz 6 gadiem - 0,7-1,5 μmol/l, 7-12 gadiem - 0,91-1,71 μmol/l, 13-19 gadiem - 0,91-2,51 μmol/l; pieaugušajiem - 1,05-2,09 μmol/l.

A vitamīns ir taukos šķīstošs vitamīns, kas pastāv divās formās: pats A vitamīns jeb retinols (atrodams tikai dzīvnieku izcelsmes produktos) un provitamīns A, kas pazīstams kā karotīns (iegūts no dzīvnieku un augu izcelsmes produktiem), ko gremošanas trakta sieniņās var pārvērst par retinolu. Aptuveni 50–90 % no uztura retinola tiek absorbēti tievajās zarnās un transportēti hilomikronu saistītā kompleksā uz aknām, kur tas tiek uzglabāts kā retinola palmitāts. Vajadzības gadījumā tas tiek izdalīts asinsritē kā retinola komplekss ar A vitamīnu saistošu proteīnu. Asins serumā A vitamīnu saistošais proteīns + retinola komplekss saistās ar transtiretinīnu. No asins seruma retinolu uzņem mērķa šūnas, piemēram, tīklenes un epitēlija fotoreceptori.

Kad organisms saņem A vitamīnu daudzumā, kas pārsniedz nepieciešamo (180–430 mcg retinola dienā atkarībā no vecuma, dzimuma un fizioloģiskā stāvokļa), tā pārpalikums nogulsnējas aknās, veidojot šī vitamīna depo. Kad retinola uzņemšana ar pārtiku samazinās, tā rezerves no aknām tiek atbrīvotas asinsritē, uzturot retinola koncentrāciju asins serumā normālā līmenī (virs 0,7 μmol/l). Citas bioloģiski aktīvās A vitamīna formas (retināls un retīnskābe) asinīs ir ļoti zemā koncentrācijā (zem 0,35 μmol/l); retinola esteri veido aptuveni 5% no kopējā A vitamīna daudzuma (0,1–0,17 μmol/l).

A vitamīnam ir svarīga loma oksidācijas-reducēšanas procesos. Retinols veicina glikogēna veidošanos aknās un muskuļos, palīdz paaugstināt holesterīna līmeni asinīs un piedalās steroīdu un dzimumhormonu sintēzē. Tas ir nepieciešams skeleta sistēmas augšanai un veidošanai, rodopsīna resintēzei, kā arī veicina gļotādu un ādas epitēlija normālu darbību, novēršot tā metaplāziju, hiperkeratozi un pārmērīgu ādas lobīšanos. A vitamīns palīdz stiprināt matus, zobus un smaganas. Pēdējos gados ir pierādīta A vitamīna daudzveidīgā loma vēža profilaksē un imunitātes regulēšanā (tas ir nepieciešams fagocitozes pabeigšanai, palielina Ig sintēzi, stimulē T-killeru veidošanos, stimulē II tipa T-helperus utt.). A vitamīns ir aktīvs antioksidants, kas galvenokārt darbojas E vitamīna klātbūtnē; tas aizsargā C vitamīnu no oksidēšanās. A vitamīna deficīts tiek uzskatīts par ļaundabīgu audzēju riska faktoru. Eksperimentāli pētījumi liecina, ka A vitamīna satura palielināšana uzturā palielina vidējo paredzamo dzīves ilgumu par 17,5%. Cinks ir būtisks kofaktors A vitamīna metabolismā (nepieciešams A vitamīnu saistošā proteīna sintēzei).

Pieaugušajiem (20–50 gadi) vidējā retinola dienas deva ir 1,2 mg (4000 SV, 1 SV atbilst 0,3 mcg retinola), grūtniecēm – 1,5 mg (5000 SV), sievietēm, kas baro bērnu ar krūti – 1,8 mg (6000 SV), cilvēkiem, kas vecāki par 60 gadiem – 2,5 mg (10 000 SV). Vismaz trešdaļa no retinola dienas devas organismam jāuzņem gatavā veidā; pārējo var segt, lietojot uzturā karotinoīdus, no kuriem organismā veidojas retinols. Jāņem vērā, ka termiskās apstrādes laikā pārtikas produktos aptuveni 30% retinola tiek iznīcināti. Retinola aktivitāte ir 2 reizes augstāka nekā karotīnam, turklāt tikai 30–40% no pēdējā tiek absorbēti zarnās. Tāpēc, izvērtējot uzturu, tiek uzskatīts, ka 1 mg retinola ir aptuveni līdzvērtīgs 6 mg karotinoīdu.

Retinola (A vitamīna) un karotinoīdu noteikšana asins serumā pēc Besī metodes, ko modificējusi L. Anisimova

Metodes princips

A vitamīna un karotinoīdu noteikšana pamatojas uz to hidrolīzi sārmainā spirta šķīdumā, kam seko ekstrakcija ar organisko šķīdinātāju maisījumu.

Reaģenti

• 11 M kālija hidroksīda (KOH) šķīdums.
• 96% etilspirts.
• 1 M kālija hidroksīda (KOH) šķīdums 96% etilspirtā: 1 tilpumu 11 M KOH šķīduma sajauc ar 10 tilpumiem 96% etilspirta. Reaģentu sagatavo pētījuma dienā. Ja sajaukšanas laikā rodas krāsojums, spirts pirms lietošanas jāattīra destilējot.
• Ksilols, ķīmiski tīrs
• Oktānskaitlis, ķīmiski tīrs
• Ksilola-oktāna maisījums: pagatavo, sajaucot vienādus ksilola un oktāna tilpumus.

Pētījumi tiek veikti, izmantojot spektrofotometru.

A vitamīna noteikšanas process

No pirksta paņemtās asinis (apmēram 1 ml) ievieto centrifūgas mēģenē un uz 20–30 minūtēm ievieto stikla krūzītē ar siltu ūdeni (temperatūra 40–45 °C). Lai atdalītu serumu, asins recekli uzmanīgi ar plānu stikla stienīti novelk ap mēģenes sieniņu malu un 10 minūtes centrifugē ar ātrumu 3000 apgr./min.

Savāc 0,12 ml seruma un pārnes aglutinācijas mēģenē, kur pēc tam pievieno 0,12 ml 1 M kālija hidroksīda spirta šķīduma. Saturu rūpīgi sakrata.

Testa mēģenes ar paraugiem uz 20 minūtēm ievieto ūdens vannā 60°C temperatūrā, lai veiktu hidrolīzi.

Paraugus atdzesē, tiem pievieno 0,12 ml ksilola-oktāna maisījuma un enerģiski krata 10–15 sekundes. Tos atkal atdzesē un centrifugē.

Augšējo slāni, kas satur A vitamīnu un karotinoīdus, uzmanīgi noņem, izmantojot Pastēra pipeti ar gumijas uzgali, un pārnes mikrokivetēs.

Paraugi tiek spektrofotometēti 328 nm viļņa garumā, lai noteiktu A vitamīnu, un 460 nm viļņa garumā, lai noteiktu karotinoīdus.

Pēc spektrofotometrijas paraugus pakļauj ultravioletajam starojumam, lai iznīcinātu A vitamīnu. Šim nolūkam 15–20 cm attālumā no mikrokivetēm uzstāda kvarca (baktericīdu) lampu, lai starojums iedarbotos uz ar šķidrumu piepildīto kivetes daļu; apstarošanas laiks ir 45–60 minūtes.

Paraugi tiek atkārtoti spektrofotometrēti 328 nm viļņa garumā. A vitamīna saturu nosaka pēc ekstinkcijas vērtību starpības (optiskā blīvuma), ņemot vērā koeficientu (faktoru) 637, ko A vitamīnam aprēķinājis Bessey.

Aprēķins tiek veikts pēc formulas:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Kur X ir A vitamīna saturs, μg/dl; 637 ir Bessey aprēķinātais koeficients A vitamīna noteikšanai; E328(1) ir šķīduma optiskais blīvums pirms apstarošanas; E328(2) ir šķīduma optiskais blīvums pēc apstarošanas.

Koeficients A vitamīna koncentrācijas konvertēšanai no µg/dL uz µmol/L ir 0,035.

Karotinoīdu saturu aprēķina, izmantojot formulu:

X = 480-E480,

Kur X ir karotinoīdu saturs, μg/dl; 480 ir Bessey aprēķinātais koeficients karotinoīdu noteikšanai; E480 ir testa šķīduma optiskais blīvums.

Piezīme

Pēc Besī teiktā, veicot pētījumus, var izmantot lielāku vai mazāku seruma tilpumu, taču tā attiecībai pret spirta šķīduma tilpumu jābūt nemainīgai, mainoties ksilola-oktāna maisījuma tilpumam (daudzumam).

Normāls A vitamīna saturs asins serumā ir: jaundzimušajiem un zīdaiņiem - 160-270 μg/l; pieaugušajiem - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Karotinoīdu saturs pieaugušo asins serumā ir 800-2300 μg/l.